FHC人正常結直腸粘膜細胞

【細胞縮寫】    FHC細胞

    【細胞名稱】    FHC(人正常結直腸粘膜細胞)

    【背景資料】    見細胞說明書

    【細胞消化時注意把握消化時間，消化不夠會導致吹打細胞時造成損傷，一般消化時間是2-3分鐘，但以鏡檢時大部分細胞縮回球形為準，一般2次即可將細胞吹打下來，消化不夠進行細胞吹打易損傷細胞。細胞系的凍存液配方：90%FBS+10%DMSO，貼壁細胞若出現分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養基進行培養】    細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外著名大學建系

    【代次】    P4

    【規格】    復蘇T25培養瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

    【細胞數】    1*10（6）

    【生物安全級別】    1

    【生物體】    人

    【組織來源】    結直腸

    【細胞形態】    上皮細胞

    【細胞特性】    貼壁

    【特別注意：如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養，建議添加雙抗培養，貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養箱孵育到第二天再做消化傳代，請優先選擇直徑6cm的培養皿進行傳代培養，如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態，請將懸浮的細胞即時離心，細胞加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天；同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基培養3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現增值而是繼續脫落死亡，請及時聯系實驗室技術人員會跟進解決】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

  細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

    【培養條件】    詳見細胞說明書

    【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

    【凍存條件】    詳見細胞說明書

    【主要文獻】    請具體查閱相關發表文章

FHC人正常結直腸粘膜細胞

 操作步驟：

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

 2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。      
     1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。     
     3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養液后吹勻。
     4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
 3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
    1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 注意事項：

1.動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細胞狀態差，很多時候是傳代的原因。
3.有時間的話，需要細胞計數，傳相應數目的細胞到培養皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措。
3.要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，細胞房的實驗穿插進行，可以節省很多時間，也不會耽誤別人的實驗。
4.個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，zui近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟。
5.細胞房不能進去太多人，避免相互干擾。