Het-1A人食管上皮細胞

【細胞縮寫】    Het-1A細胞

【細胞名稱】    Het-1A(人食管上皮細胞)

【背景資料】    見細胞說明書

【細胞來源】    細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外著名大學建系

【代次】    Het-1A【人食管上皮細胞】P4

【規格】    復蘇T25培養瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

【細胞數】    1*10（6）

【生物安全級別】    1

【生物體】    人

【組織來源】    食癌

【細胞形態】    詳見細胞說明書部分

【細胞特性】    貼壁

【細胞活力】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

【細胞】    細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

【培養條件】    詳見細胞說明書

【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

【凍存條件】    詳見細胞說明書

【主要文獻】    請具體查閱相關發表文章

Het-1A人食管上皮細胞

培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備基礎培養基( GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉 0.11g/L)；優質胎牛血清，10%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

細胞注意事項：

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2.先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置數小時（4h左右），穩定細胞狀態，切忌在溫箱內靜置過夜。

3.靜置后鏡檢，拍照，記錄細胞狀態。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。

4.  懸浮細胞：將細胞瓶內液體都轉移至無菌離心管內，1000 轉/分鐘離心5min，培養基上清可備用，管底細胞沉淀用培養基重懸。鏡檢時若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞瓶內培養；若密度未超過80%，細胞懸液移至原瓶繼續培養，待達到80%時再正常傳代。備注：聚團生長慢，有密度依賴，必須使用T25培養瓶豎立培養，3天一次半量換液一次，1-2周傳代一次。

貼壁細胞：若細胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細胞瓶內的培養基，留8ml繼續培養至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。備注：細胞貼壁慢，傳代后細胞放2天不動。

5.細胞瓶內的培養基含血清和雙抗，可收集后4℃保存備用，可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養基，一半用客戶自備的培養基，使細胞逐漸適應培養條件，以免因不適應而造成生長狀態不佳。