WM35人黑色素瘤細胞

造成實驗室細胞污染常見情況總結：
細胞培養中最常見污染的是細菌、真菌和支原體污染。細胞一旦污染，大多數較難處理。那么，哪些情況我們不注意的話就會造成細胞污染呢？我們根據常見細胞培養實驗分析總結下。
違規操作：1. 為節省時間，有人已經用超凈臺四個多小時，不開紫外滅菌30min,酒精擦拭后直接開始試驗。2. 器材或者溶液很久沒用，未檢測是否污染而直接使用；離心管多次使用，槍頭為了方便交叉使用。3. 超凈臺不點酒精燈；點了酒精燈放在右上角，而你在左下角做試驗。4. 不帶手套，徒手操作。5. 細胞培養間配備槍式移液器、手術器械、離心機、冰箱等儀器設備以及的實驗服和拖鞋，未定期消毒。物品被帶出細胞房使用。培養細胞過程中使用的所有實驗用具，如移液管、一次性槍頭、一次性塑料離心管、凍存管等未按要求滅菌使用（通常需121°C高壓滅菌20分鐘后37％烤干備用）。
超凈臺和桌面，東西太多太亂：超凈臺不是儲物箱，什么培養皿、各種規格的板子、槍頭就不要堆在超凈臺！這樣就會有許多紫外線顧不到的衛生死角。細胞房其他的桌面，切忌東西堆積如山，不要將酒精棉球、標簽紙、牛皮紙買來后全部堆在細胞房！一不小心“飄”進你的細胞培養板里，細胞就會養的不好，啥時候死了都不知道！
培養箱太久沒清潔：細胞污染了，并非直接扔了培養皿就不管了，首先你還得看看這個恒溫培養箱里其他培養皿或孔板里的細胞是否污染，如果有而且好幾個板子都有類似的污染塊，那很可能是培養箱中的水或者空氣污染了，得給培養箱做個大掃除，重新酒精消毒，照紫外；孵箱里的水，水沒了要記得加，還得記得十天半個月的就用酒精擦擦托盤。
細胞房人多口雜，難管理：在細胞房這種衛生要求高，人多了，不確定因素多了，難以保證試驗在無菌條件下操作。出入試驗室，實驗服當風衣穿，不扣紐扣，不戴鞋套，就容易造成細胞污染；超凈臺做實驗時，喜歡說話聊著做試驗，要是還不帶口罩，里面就有很多細菌等著去攻擊你的細胞呢！" 

注意事項：
1. 收到細胞后先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養，隔天再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們，信息確認后我們為您再免費寄送一次。
4. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。
5. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和公司技術部溝通交流。
6. 該細胞只能用于科研，不得用于臨床應用

WM35人黑色素瘤細胞

細胞處理方法：

一、貼壁細胞
1、 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規范，打開細胞培養瓶。
4、37度平衡1-2小時。
5、用移液管吸取培養基，到50ml離心管中，剩下細胞密度達到80%至90%可以傳代，如沒有達到添加6ml新鮮培養基繼續培養。
6、如果肉眼檢查上清有細胞，對50ml上清進行離心收集細胞，如果細胞連片狀態，棄掉上清對收集的細胞進行胰酶消化（1ml胰酶37度），接種培養。

二、懸浮細胞
1、接收到細胞，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張）。
2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內打開外包裝。
3、嚴格遵循無菌操作規范，打開細胞培養瓶。
4、細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒）。
5、1000rpm，5min 離心，用吸管小心吸出上清，加入培養基，重懸細胞。
6、將重懸好的細胞轉入六孔板或者細胞培養瓶種，加入新鮮培養基，置于 37℃，5%CO2 培養（大部分細胞）。