HuH7肝癌細(xì)胞系

【細(xì)胞縮寫】    HuH-7細(xì)胞

    【細(xì)胞名稱】    HuH-7(人肝癌細(xì)胞)

    【背景資料】    據(jù)說產(chǎn)甲胎蛋白，胰酶α抗體，血漿銅藍(lán)蛋白，纖維蛋白原，纖維粘連蛋白等。

    【細(xì)胞消化時注意把握消化時間，消化不夠會導(dǎo)致吹打細(xì)胞時造成損傷，一般消化時間是2-3分鐘，但以鏡檢時大部分細(xì)胞縮回球形為準(zhǔn)，一般2次即可將細(xì)胞吹打下來，消化不夠進行細(xì)胞吹打易損傷細(xì)胞。細(xì)胞系的凍存液配方：90%FBS+10%DMSO，貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細(xì)胞進行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)】    細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學(xué)建系

    【代次】    P4

    【規(guī)格】    復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

    【細(xì)胞數(shù)】    1*10（6）

    【生物安全級別】    1

    【生物體】    人

    【組織來源】    肝

    【細(xì)胞形態(tài)】    上皮細(xì)胞樣

    【細(xì)胞特性】    貼壁

    【特別注意：如使用公共實驗室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)，貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)，如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細(xì)胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請及時聯(lián)系實驗室技術(shù)人員會跟進解決】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

    【細(xì)胞】    細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

    【培養(yǎng)條件】    詳見細(xì)胞說明書

    【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

    【凍存條件】    詳見細(xì)胞說明書

    【主要文獻(xiàn)】    請具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

HuH7肝癌細(xì)胞系

傳代操作步驟：

一、貼壁細(xì)胞傳代

1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)。

2.吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞。

3.加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用。

4.胞用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡。

5.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。

二、懸浮細(xì)胞傳代

1.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min。

2.棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液。

3.將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

培養(yǎng)的過程中，經(jīng)常見到黑色的顆粒或小黑點，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢？原因：

黑點，大概有細(xì)胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進細(xì)胞間的,還有就是血清和培養(yǎng)基

1、如果小黑點有增殖趨勢，那么就有可能是污染了，需要處理；

2、如果小黑點沒有增殖趨勢，且不影響細(xì)胞生長，也不影響實驗的話，則可能

 a、是“黑膠蟲”，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭議。有人認(rèn)為是從血清中來的一種原蟲，也有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶。“黑膠蟲”可寄生于動物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲”與細(xì)胞競爭性生長，開始時對細(xì)胞并沒有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候， 細(xì)胞生長就會受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動的開展和進行。以前（這個至少是10年以前），很多實驗室在養(yǎng)細(xì)胞時用國產(chǎn)血清，那時的血清可能質(zhì)量不過關(guān)，有所謂的“黑膠蟲”，但是也沒有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清，即使國產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了。

 b、是細(xì)胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運動。

 c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)ZYC3153    人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞    SK-NEP-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3154    人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞    786-O [786-0]    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3155    人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞    Caki-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3156    人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞    ACHN    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3157    人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞    HEC-1-A    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3158    人絨毛膜癌細(xì)胞    JEG-3    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3159    人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞    EA.ZY926    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3160    人膀胱癌細(xì)胞    5637    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3161    人輸尿管上皮永生化細(xì)胞    SV-HUC-1    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3162    人滑膜肉瘤細(xì)胞    SW 982 [SW-982, SW982]    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3163    人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞    T24    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3164    人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞    HuT 78    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS 
ZYC3165    人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞    COLO 320DM     形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細(xì)胞樣    培養(yǎng)條件：MEM/F12 +10% FBS